GlycanExplorer 应用案例：西妥昔单抗与人 IgG N-糖链岩藻糖基化对比分析

背景

糖基化生物治疗药物占全部生物治疗药物的半数以上，其中单克隆抗体（mAbs）占据主要份额，约占生物制药市场的一半。治疗性抗体的成功与否主要取决于其临床呈现。最大化疗效可减少治疗过程中所需的药物剂量，从而减少成本。多项研究表明，岩藻糖基化在治疗功效中起着重要作用。非岩藻糖基化抗体糖链因其增强的抗体依赖性细胞介导的细胞毒性（ADCC）而被认为比岩藻糖基化糖链更有效。糖链中岩藻糖基化的程度可为进一步的治疗研究提供调控目标。

分析方法

尽管控制岩藻糖基化程度超出了本研究范围，我们使用 GlycanExplorer 软件对西妥昔单抗（Cetuximab）和人 IgG N-糖链中的岩藻糖基化进行了分析。西妥昔单抗和人 IgG 样品各包含四个技术重复，使用 Thermo Fisher Q Exactive Plus 质谱仪采集数据，并导入 GlycanExplorer。利用软件稳健的 LC-MS 峰拾取算法，我们基于所有原始文件的 MS1 和 MS/MS 数据创建了候选峰列表。检查到的化合物在各样品重复之间进行对齐，以识别普遍存在的化合物。软件提供完善的实验设计模块，其中创建了名为“Fucosylated”的分组，用于根据核心岩藻糖基化对可能的糖链结构进行分类。随后，对检查到的 LC 化合物进行 MS/MS 计算机模拟碎片匹配和高分辨率精准质量（HRAM）糖链谱图数据库搜索，前体离子和产物离子的质量容差均设为 10 ppm。软件鉴定出可能的糖链结构，并将其分类为岩藻糖基化或非岩藻糖基化。条形图、饼图等统计可视化方式有助于对比西妥昔单抗和人 IgG 样品中岩藻糖基化糖链的数量，这可能对进一步的治疗研究具有参考价值。